2×CTAB提取緩沖液

● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：                                                Ver.740662

● 產(chǎn)品介紹：

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物而不沉淀核酸。通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入醇（乙醇或異丙醇）沉淀即可使核酸分離出來。

    2×CTAB提取緩沖液成分：2%(w/v，55 mM)CTAB，100 mM Tris (pH 8.0)，20 mM EDTA,1.4 MNaCl,，還原劑(隨用隨加) 。

● 儲(chǔ)存、運(yùn)輸及效期：

   常溫貯存；常溫運(yùn)輸；有效期2年。

注：環(huán)境溫度低于15℃時(shí)，溶液會(huì)有結(jié)晶，37℃徹底溶化后使用。

● 實(shí)驗(yàn)操作步驟：

一 DNA提?。?span>

   1.1 2×即用型CTAB提取液配制：

按照終濃度0.2% （v/v）加入還原劑，如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。配好后65℃預(yù)熱后備用。

1.2 材料研磨：

取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。

1.3 樣品裂解：

按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉(zhuǎn)入1.5 ml離心管中，立即加入65℃預(yù)熱的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。

注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則后續(xù)純化不能在一個(gè)離心管內(nèi)完成；CTAB溶液在低于15℃時(shí)會(huì)形成沉淀析出，因此，在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于15℃。

1.4 離心去雜質(zhì)：

14000 g 常溫離心5分鐘，轉(zhuǎn)移上清至新的1.5 ml離心管中。

1.5去除RNA：

上清中加入1/100上清體積的RNaseA溶液（10 mg/ml）（貨號(hào)：RN001），如500 μl上清中加如5 μl RNaseA溶液，37℃處理20分鐘。

1.6 第一次純化：

步驟1.5溶液中加入等體積的Tris酚:氯仿:異戊醇（25:24:1），輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g 離心10分鐘，小心吸取上清到一干凈1.5 ml離心管中，不要觸及下層。

1.7 第二次純化：

上清中加入等體積氯仿:異戊醇（24:1），顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g離心10分鐘，保留上層水相。

1.8 沉淀DNA：

將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml離心管中，加入0.6倍體積的冰冷異丙醇，輕柔混勻，-20℃靜

置30分鐘；14000 g4℃離心10分鐘。

1.9 漂洗DNA：

1.9.1 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃14000 g 3分鐘，吸棄乙醇。

1.9.2 4℃ 14000 g 1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺(tái)吹干沉淀。

注：沉淀不能徹底干燥，否則不好溶解。

1.10 貯存DNA：

加入50-100 μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?

二 RNA提取：

注：以下程序請注意所有試劑都要保證RNase-free。

2.1 2×即用型CTAB提取液（RNase-free，現(xiàn)用現(xiàn)配）配制：

        2×CTAB提取緩沖液中按照1/1000體積加入DEPC，如100 ml中加入100 μl DEPC，混勻后過夜處理，隨后高溫高壓，即為2×即用型CTAB提取緩沖液（RNase-free）。按照終濃度1 % （v/v）加入還原劑，如1 ml 2×CTAB提取緩沖液（RNase-free）中加入10 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后65℃預(yù)熱備用。

2.2 材料研磨：

取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。

2.3 樣品裂解：

按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉(zhuǎn)入1.5 ml離心管中，立即加入65℃預(yù)熱的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。

注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則后續(xù)純化不能在一個(gè)離心管內(nèi)完成；CTAB溶液在低于15℃時(shí)會(huì)形成沉淀析出，因此，在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于15℃。

2.4 離心去雜質(zhì)：

14000 g 常溫離心5分鐘，轉(zhuǎn)移上清至新的1.5 ml離心管中。

2.5 第一次純化：

上清中加入等體積的水酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g 離心10分鐘。

2.6 第二次純化：

將上清液轉(zhuǎn)入另一1.5 ml離心管中，加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g離心10分鐘。

2.7 沉淀RNA：

將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml離心管中，加入1/2體積7.5 M LiCl溶液（RNase-free）（貨號(hào)：LC1030），輕柔混勻，-20℃ 靜置30分鐘；14000 g4℃離心10分鐘。

2.8 漂洗RNA：

2.8.1 去上清液, 沉淀中加入1ml 70%乙醇（RNase-free），吹打漂洗沉淀，14000 g4℃3分鐘，吸棄乙醇。

2.8.2 14000 g4℃1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺(tái)吹干沉淀。

注：RNA沉淀不能過分干燥，否則不好溶解。

2.9 貯存RNA：

加入50-100 μl的RNase-free水溶解RNA，-80℃保存?zhèn)溆谩?

使用RTG2405  2×CTAB提取緩沖液產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表（4篇）：

1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.

Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li

Journal: Foods. 2021, 10, 2610.

Institution：Hefei University of Technology

Paper link：https://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610

2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.

Author: YaqingXiao,PeijunLi

Journal: Food Research International. 2020.

Institution：Hefei University of Technology

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247

3. [2023 IF=4.4] Therapeutic potential of Xihuang Pill in colorectal cancer: Metabolomic and microbiome-driven approaches.

Author: Chen Zhang, Conglu Sui, Xiaona Ma, Chongyang Ma，Xinhui Sun, Changming Zhai, Peng Cao, Yue Zhang,Jinjun Cheng, Tong Li，Jiayang Sai

Journal: Frontiers in Pharmacology 15:1402448. 2024

Institution：Department of oncology, The Third Af?liated Hospital, Beijing University of Chinese Medicine

Paper link：http://dx.doi.org/10.3389/fphar.2024.1402448

4. [2023 IF=6.4] Integrated transcriptomic and metabolomic revealed the effect of salicylic acid treatment on improving the storability of ‘Ventura’ celery.

Author: Pei-Zhuo Liu, Ya-Hui Wang, Li-Xiang Wang, Yong-Ju Wei, Yue-Hua Sun, Xu Sun,Chen Chen, Ya-Peng Li , Ai-Sheng Xiong.

Journal: Postharvest Biology and Technology 228 (2025) 113656

Institution：College of Horticulture, Nanjing Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.postharvbio.2025.113656