Picogreen雙鏈 DNA（dsDNA）定量試劑

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent

Ver750452-1.0

●  產(chǎn)品規(guī)格：

● 簡(jiǎn)介：

Picogreen 是一種極為靈敏的熒光核酸染料，其僅在與DNA 雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與 DNA 濃度呈正比，因而可用于精確測(cè)量多個(gè)來(lái)源的 dsDNA，包括基因組 DNA、病毒 DNA、PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物、測(cè)序文庫(kù)等。本產(chǎn)品定量具有以下優(yōu)勢(shì)：1. 靈敏度高：可檢測(cè)低至200 pg的dsDNA，節(jié)省寶貴樣品；2. 特異性強(qiáng)：在等摩爾的RNA存在的條件下，對(duì)dsDNA具有特異性；3. 耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無(wú)需從反應(yīng)混合物中純化DNA。4. 易于使用-只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。5. 適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測(cè)和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

●  貯存、效期及運(yùn)輸：

-20℃避光保存；有效期2年；濕冰運(yùn)輸。

●  使用方法：

注：本方法參照 2010《中國(guó)藥典》進(jìn)行操作。

1．染料工作液的配置：

PicoGreen dsDNA 定量試劑取出后平衡至常溫，該試劑是以 0.1 ml 200×的濃縮液形式保存于DMSO中的。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量用 1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按 1:200 的比例稀釋 PicoGreen 濃縮液。注意事項(xiàng)：

1.1 由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。

1.2  PicoGreen試劑見(jiàn)光易分解，所以應(yīng)將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。

1.3 溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。

2．標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：

取λ DNA 標(biāo)準(zhǔn)品（貨號(hào)：RTL6101），用無(wú)菌 TE buffer 配制成100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

注：標(biāo)準(zhǔn)品也可用其他已知濃度的純化 DNA；有一些產(chǎn)品描述可使用小牛胸腺 DNA 作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照我們實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)，并不推薦它作為標(biāo)準(zhǔn)品。

3．標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋：

3.1 母液稀釋：使用 TE 緩沖液將 100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為 2 μg/ml。

3.2 梯度稀釋：參照下表，對(duì)DNA 標(biāo)品母液進(jìn)行梯度稀釋。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：

向經(jīng)稀釋的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入1000 μl 染料工作液混勻，避光常溫孵育5 min。使用酶標(biāo)儀或熒光計(jì)檢測(cè)熒光強(qiáng)度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；將溶液加入比色皿或取200 μl加入微孔板，確信不要在樣品中引入氣泡；以 1×TE 緩沖液空白對(duì)照，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品熒光值；用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度（ng/ml）對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.4 測(cè)量剩余樣品的熒光值：熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來(lái)產(chǎn)生 DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。