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10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),溶液型)

10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),溶液型)

產(chǎn)品編號:TB1040

產(chǎn)品規(guī)格:500ml

數(shù)量
價格 ¥180

10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),溶液型)

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

TB1040

10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),溶液型)

500 ml

簡介

10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),溶液型)可以用于Western時濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜,原始配方是  Towbin buffer(1×)(Towbin et al. PNAS 1979,76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %,pH ~8.3。為方便客戶使用,10×轉(zhuǎn)膜緩沖液中沒有添加甲醇和SDS,客戶根據(jù)需要配制1×轉(zhuǎn)膜緩沖液時自行添加。

保存、運輸和貯存

常溫保存,有效期兩年。

配成溶液后建議4℃保存,有效期6個月。

1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液建議現(xiàn)用現(xiàn)配,不建議保存。

1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液配制方法:

 

 

即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液 配制量 1

 

10×Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液

100 ml

 

 

變性蛋白

非變性蛋白

20 kD蛋白

無水甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白

無水甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白

無水甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超純水

定容至1升,不要調(diào)節(jié)pH,pH~8.3


注:甲醇和SDS在轉(zhuǎn)膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結(jié)合在膠上,而SDS讓蛋白更加離開膠。因此對大蛋白轉(zhuǎn)膜來說,多加SDS,少加甲醇;而對小蛋白轉(zhuǎn)膜,多加甲醇,少加SDS。

  轉(zhuǎn)膜:

1. 膜的選擇:轉(zhuǎn)膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來,大于20 kD蛋白選擇0.45 μm孔徑,低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。


蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作:

負(fù)極(電轉(zhuǎn)夾黑色面)-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙-海綿墊-正極(電轉(zhuǎn)夾白色面)

3. 轉(zhuǎn)膜條件:

以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考,客戶針對自己的目的蛋白,最好經(jīng)過1-2次預(yù)實驗后,確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

膜孔徑

蛋白大小

穩(wěn)流

建議時間

降溫措施

0.22 μm

低于20 kD

200 mA

~30分鐘

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分鐘

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分鐘

需要

0.45 μm

高于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小時

需要

 


 
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