RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
● 產品貨號及規(guī)格：
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貨號
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包裝
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貯存
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RTR2103-01
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50次×20μl
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-20℃
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● 產品組成：
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組成
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包裝
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5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix
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200 μl
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gDNA Remover
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50 μl
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10×gDNA Remover Buffer
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100 μl
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RNase-free H2O
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1 ml
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● 產品簡介：
本試劑盒含有反轉錄需要的全部試劑（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反應
Buffer，Oligo (dT)18，Random primer）,濃度為5×。進行RNA反轉錄反應時，只需加入模板和RNase Free H2O 即可高效合成第一鏈cDNA，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。本制品含有去基因組成分gDNA Remover，以RNA為模板進行cDNA第一鏈合成時，可以同步去除基因組DNA污染，與傳統(tǒng)DNaseI消化對比，gDNA Remover消化后無需加入EDTA進行失活；反應結束后，65℃加熱2分鐘，就可以不可逆失活。具有快速簡便、重復性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點。該試劑盒采用的反轉錄酶去除了 RNase H活性，從而避免反轉錄過程中降解RNA。 同時經過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強，可耐受50℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可顯著打開 RNA二級結構，從而提高復雜 RNA 模板的擴增性能、提高反轉錄 cDNA的長度（可以獲得12 kb cDNA）和產量，從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可廣泛用于 2nd
Strand 的合成、 雜交、 PCR擴增、Real-Time PCR 反應等。
● 貯存和運輸：
開封后-20℃貯存兩年；濕冰運輸。
● 使用方法：
一. 去除基因組DNA污染：
1.1冰上配制如下體系：
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組份
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加入體積
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Total
RNA/mRNA
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100ng-2μg(＜8
μl)
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gDNA
Remover
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1μl
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10×gDNA
Remover Buffer
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1
μl
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RNase-free
H2O
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up
to 10 μl
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1.2輕柔混勻，快甩離心，37℃處理 2 min，去除基因組污染，冰上放置。
注：若RNA中基因組DNA污染嚴重，可以延長37℃處理5
min。
1.3
65℃處理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。
二. 第一鏈cDNA合成（反轉錄反應）：
2.1冰上配制如下體系：
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組份
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加入體積
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步驟1中的反應液
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10
μl
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5×RTScript
1st Strand cDNA Synthesis MasterMix
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4
μl
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RNase-free
H2O
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6
μl
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2.2
反轉錄：輕柔混勻，快甩離心； 50℃孵育15 min，
2.3
終止反應：85℃孵育 5 min，終止反應。
反應產物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃
保存，長時間保存建議-80℃ 放置。
● 注意事項：
5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis
MasterMix中已經包含Oligo (dT)18和Random primer，不僅適用于包含poly(A)結構的真核生物mRNA，也適用于不含poly(A)結構的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。