10×堿性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液

簡介：

10×堿性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液適用于堿性蛋白電泳后凝膠上非變性堿性蛋白的轉(zhuǎn)膜。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷，稀釋后無需調(diào)節(jié)pH值。緩沖液中不含任何變性劑，保證了轉(zhuǎn)膜中維持蛋白的活性狀態(tài)。該緩沖液稀釋10倍可配成5升即用型1×緩沖液。

保存條件：

常溫保存，兩年有效。

配制方法：

將10×轉(zhuǎn)膜緩沖液用超純水稀釋10倍即配成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液。

使用方法：

1. 堿性蛋白非變性電泳：

各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同，因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱為堿性蛋白質(zhì)，等電點偏堿性，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點就偏酸性。分離堿性蛋白時候，要利用低 pH 凝膠系統(tǒng)，分離酸性蛋白時候，要利用高 pH 凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統(tǒng)，蛋白會帶負電荷，蛋白會相陽極移動；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進行，蛋白帶正電荷，這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。堿性蛋白電泳可參考使用堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號:RTD6131）。

2. 轉(zhuǎn)膜：

① 轉(zhuǎn)膜方法：堿性蛋白在非變性狀態(tài)的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。

 ② 三明治結(jié)構(gòu)：由于堿性蛋白pI＞7 在酸性轉(zhuǎn)膜緩沖液中帶正電荷，轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜不同（傳統(tǒng)的酸性蛋白轉(zhuǎn)膜是根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治）。堿性蛋白轉(zhuǎn)膜根據(jù)“黑膜白膠”制作三明治，即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯負極，凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極，這樣凝膠上帶正電荷的堿性蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。

堿性蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作：

負極（電轉(zhuǎn)夾黑色面）-海綿墊-3至5層濾紙-膜-凝膠-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuǎn)夾白色面）

 ③ 膜的選擇：膜可以用PVDF膜或NC膜，根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來，大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑，低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化，NC膜只需用轉(zhuǎn)膜緩沖液潤濕就可以。

④ 轉(zhuǎn)膜條件：

由于在非變性條件下，不同堿性蛋白的空間結(jié)構(gòu)，聚合狀態(tài)，電荷數(shù)量都有不同，以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對自己的目的蛋白，最好經(jīng)過1-2次預實驗后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

RTD6128 堿性蛋白非變性電泳蛋白Marker

PL110 5×甲基綠堿性蛋白上樣緩沖液

TG160P 5×堿性蛋白電泳緩沖液（非變性電泳）

BP5015 10×堿性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液